Анализ кала на Хеликобактер пилори: метод ПЦР и антигенный тест.

При разных заболеваниях желудочно-кишечного тракта требуется проходить комплексное обследование. Если выявляют бактерию Хеликобактер пилори в кале, то диагностируют гастрит, язву, дуоденит и другие более серьезные болезни. Собирать регулярно каловые массы на определение количества патогенных микроорганизмов требуется и во время медикаментозной терапии, чтобы была возможность следить за положительной динамикой терапии.

В каких ситуациях назначается?

Сдавать каловые массы на анализ требуется при разных патологических нарушениях в системе пищеварения. Бактерии Хеликобактер пилори определяют несколькими методиками, каждая из которых применяется при различных нарушениях. ПЦР анализ кала на антиген нужно сдавать в таких случаях:

• язвенная болезнь желудка;
• образование эрозий в 12-персной кишке и других органах ЖКТ;
• атрофический процесс в слизистой оболочке;
• полипы и новообразования;
• гастроэзофагеальный рефлюкс, характеризующийся забросом желудочного содержимого в пищевод;
• генетическая предрасположенность к разным патологиям органов брюшной полости.

ПЦР-исследование кала — самый точный метод контроля состояния микрофлоры желудка при лечении антибактериальными препаратами.

• нарушенный стул, изжога, чувство дискомфорта и другие патологические проявление дисфункции пищеварительного тракта;
• перед проведением курса приема антибиотиков;
• железодефицитная анемия либо тромбоцитопения неопределенного происхождения;
• генетический фактор;
• наличие инфекции у ближайшего окружения.

Хеликобактер при беременности: опасность для плода и методика лечения

Болезнетворная бактерия не оказывает влияния на течение беременности и состояние ребенка

Это интересно: Антидепрессанты. Список лучших препаратов нового поколения, трициклические, растительного происхождения, по рецепту и без

В период беременности желудочно-кишечный тракт подвергается большой нагрузке. При этом очень часто наблюдается изжога, боль в эпигастральной области и др. Риск развития язвы очень высокий, поэтому будущая мама должна пройти обследование на выявление данной инфекции, чтобы избежать возможных нарушений.

Обследование лучше выполнить на первых месяцах, так как с увеличением срока диагностика затрудняется. Для диагностики применяются неинвазивные методы исследования. Эффективным диагностическим методом определения Хеликобактер является желудочное зондирование. Процедура проводится щадящим способом. Эндоскопия проводится в редких случаях и с большой осторожностью, так как увеличивается давление на органы матки.

Лечение при беременности и в период лактации хеликобактериоза запрещено, из-за возможного негативного влияния антибиотиков на плод.

Из препаратов разрешаются Фосфалюгель, Маалокс. Из спазмолитиков только с разрешения врача можно использовать Дротаверин, Баралгин, Папаверин.

Если хеликобактерная инфекция активно проявляется во время вынашивания, то симптомы токсикоза ярко выражены и появляются очень рано. Токсикоз может наблюдаться вплоть до 5 месяца. Беременная женщина должна придерживаться специальной диеты и исключить из рациона продукты, раздражающие слизистую оболочку желудка. Диета №1 назначается в острый период. Запрещается употреблять жирные сорта мяса и рыбы, наваристые бульоны, копченые продукты, капусту, шпинат, редьку и т.д.

Подготовка: что надо знать?

Антигенный анализ кала на наличие H. Pylori может дать ложные результаты, если не придерживаются следующие рекомендации:

• За несколько суток до проведения лабораторной манипуляции отказываются от приема антибактериальных и слабительных медпрепаратов. Если терапию прекратить невозможно, то о ней предупреждают доктора.
• Собрать материал для обследования необходимо в предварительно помытую тару, лучше использовать стерилизованную емкость, которую приобретают в аптеке. Категорически запрещено для анализа на Хеликобактер пилори использовать кал после клизмы или применения препаратов со слабительным действием. В таких случаях достоверность результатов низкая.
• Собранный материал доставляют в лабораторию не позже, чем через 12 часов после забора. Если сразу же не удалось сдать анализ на диагностику, то материал хранится на протяжении суток при температуре 2—8 градуса.
• Повторный анализ кала на Хеликобактер пилори сдается спустя месяц после проведения антибактериальной терапии.

Антиген H.pylori в фекалиях

Биологический материал можно исследовать разными способами.

Метод	Сроки проведения	Расшифровка результатов
ПЦР	1 рабочий день	отрицательно; положительно
Бакпосев	от 6 до 12 дней	не обнаружено 1 степень – нет роста на твердой среде; 2 степень – 10 колоний; 3 степень – до 100 колоний в твердой среде; 4 степень – выше 100 колоний
ИФА	Материал – венозная кровь, в течение рабочего дня, срочно за 2 часа	положительно – 1,1 Ед/мл, высокий риск; сомнительно – от 0,9 до 1,1 Ед/мл , рекомендуется повтор через 2 недели; отрицательно – ниже 0,9 Ед/мл, риск низкий

Рекомендуем почитать:

Использование препаратов простагландинов в гастроэнтерологии

Современные диагностические методы позволяют узнать многое о состоянии здоровья человека по его биологическим жидкостям: крови, моче, фекалиям.

Исследуя кал, можно узнать, поселилась ли в организме бактерия Н.руlori, способная вызывать гастриты, язвы желудка и провоцировать онкопатологию.

Кал на наличие или отсутствие данного микроба можно изучать тремя способами: культуральным, иммунологическим, и наиболее достоверным и распространённым – методом полимеразно-цепной реакции (ПЦР).

Сама бактерия крайне редко встречается в фекалиях в своей привычной S-образной форме целиком. Толстый кишечник и каловые массы не являются благоприятной средой для микроорганизма, поэтому, попадая в них, она может принимать круглую кокковую форму, изредка встречаясь в испражнениях именно в таком виде.

Культуральный метод подразумевает под собой посев части исследуемого материала на питательную среду, в которой бактерия будет хорошо себя чувствовать и начнёт размножаться.

Происходит рост колоний, которые анализируются, окрашиваются специальными реактивами и исследуются под микроскопом. Данным способом в прямом смысле выращивают патогенные микробы с целью их дальнейшего изучения.

Кроме обнаружения самой бактерии, метод позволяет установить чувствительность патогена к тому или иному антибиотику. Если при добавлении лекарственного препарата рост колонии сохраняется – Н.руlori устойчива к антибактериальному средству, а если микроорганизмы погибают – имеет смысл назначить данный препарат пациенту с целью лечения и эрадикации, бактерии чувствительны к нему.

Культуральный способ весьма достоверен, но только в том случае, если во взятом биологическом материале обнаружена S-форма микроба. Метод имеет свои недостатки, и по этой причине не слишком распространён:

• Сроки исследования занимают от 6 до 12 дней
• Дорогостоящие среды для высевания хеликобактерий
• Специфические условия для сред, обеспечивающие рост колонии, которые сложно воспроизвести в лаборатории
• Редкая встречаемость S-образных форм бактерии в испражнениях, пригодных для роста в питательных условиях (кокковые формы не исследуют)

• Фекалии пациента могут быть подвергнуты иммунологическому исследованию, которое позволяет выявить уже не сам микроорганизм, а его части – антигены.
• Для этого:
• Используются специальные антитела, направленные на обнаружение чужеродного антигена – частей бактерии, продуктов её жизнедеятельности, генетического материала.
• Взаимодействуя с чужеродным агентом, антитела образуют специфический комплекс, который и определяется иммуно-ферментным анализом.
• Данный способ изучения кала редко применяется в России, не многие лаборатории оснащены необходимыми реактивами и необходимыми тестами.
• Но в перспективе возможно включение данного способа обнаружения хеликобактер в качестве скрининг-тестов: исследования широких групп населения на заражённость бактерией.

1. Это наиболее распространённый метод исследования фекалий на данную бактерию, обладающий высокой точностью.
2. Суть способа в следующем:
3. Из биологического материала пациента выделяется участок ДНК бактерии, который затем многократно искусственно дублируется на специальном аппарате, так происходит восстановление гететического кода Н.
   руlori
4. Когда геномный фрагмент микроба достигает достаточных размеров, его сравнивают с эталонным и делают вывод об исследуемом микроорганизме: хеликобактер ли это или другой патоген.
5. Положительный ПЦР анализ означает наличие в организме человека хеликобактерной инфекции: бактерия присутствует в желудке, ее фрагменты ДНК обнаружены в кале и совпали с эталонными.

Достоинства ПЦР-метода:

• Высокая точность: даже незначительного количества генетического материала достаточно для исследования с большим процентом достоверности, приближающимся к 99%.
• Быстрота исследования. 2 суток достаточно для анализа, но существуют экспресс-способы, позволяющие установить диагноз за несколько часов.
• Безболезненность. Способ атравматичен, неинвазивен. Позволяет обследовать маленьких детей, пожилых, ослабленных пациентов, которым противопоказана ФГДС с биопсией и другие эндоскопические манипуляции.
• Для точного результата не обязательно обнаружение ДНК-фрагментов именно S или спиралевидных форм, части кокковых микробов (наиболее встречающихся в испражнениях) тоже подходят для анализа.

У ПЦР-диагностики значительно больше плюсов, чем минусов. К недостаткам можно отнести:

• Относительно высокую стоимость анализа.
• Сохранение фрагментов ДНК микроба в фекалиях и после эрадикации. Даже если лечение успешно пройдено и бактерия отсутствует в организме, ещё спустя какое-то время фрагменты ДНК обнаруживаются в биологическом материале и стул тест на хеликобактер может дать положительный результат. Поэтому с целью контроля излеченности рекомендуется ПЦР-диагностика не ранее, чем через 1 месяц после окончания терапии.
• Специальная дорогостоящая высокотехнологичная аппаратура, для работы на которой необходим подготовленный и обученный персонал.

Все диагностические исследования, проводимые с фекалиями пациента, относятся к манипуляциям ин витро – «в пробирке», «в стекле», вне организма человека.

Они обладают достаточно высокой точностью и информативностью, если преследуют цель обнаружения микроба.

При исследовании антибактериальной чувствительности колоний микробов на питательных культурах, было выявлено, что самые подходящие препараты для бактерий ин витро, «не работали», оказывались малоэффективными при лечении пациента.

Результаты исследований чувствительности бактерии к антибиотикам «в пробирке» не всегда точны.

Информативность диагностического теста зависит не только от выбранного исследования, качества оборудования и квалификации персонала, а еще и от того, как пациент подготовился к анализу.

Кал для исследования необходимо правильно собрать:

• После дефекации часть фекальных масс необходимо поместить в стерильный контейнер для сбора биологического материала, который нужно заранее приобрести в аптеке или в лаборатории.
• Исключить попадание в биологический материал крови, мочи, слюны, гноя и других посторонних примесей, которые с большой вероятностью исказят результаты анализа.
• Контейнер с содержимым необходимо плотно закрыть и доставить в лабораторию не позднее 4-5 часов до исследования.

Кроме соблюдения технических моментов сбора материала для анализа, на протяжении нескольких дней до сдачи кала, нужно соблюдать следующие рекомендации:

• За неделю до сдачи перестать принимать антибиотики.
• За три дня не употреблять алкоголь, пищу, с большим содержанием клетчатки, а также способную приводить к окраске каловых масс: свеклу, напитки с красителями.
• Не применять ректально свечи либо мази, не пользоваться слабительными препаратами.

Соблюдение вышеописанных правил позволить врачу лабораторной диагностики максимально точно оценить состояние здоровья пациента и сделать правильные выводы при анализе.

ПЦР — диагностика фекалий наиболее достоверна из всех трех вышеописанных способов, она в какой-то степени уступает лишь биопсийному эндоскопическому исследованию.

ПЦР-анализ кала редко дает ложноположительные результаты, обладает высокой специфичностью, позволяет исследовать ДНК-материал часто встречаемых кокковых форм хеликобактерий в испражнениях.

Достоверность культурального и иммунологического метода ниже, чем ПЦР. Эти методы «грешат» появлением ложноположительных результатов, но в совокупности с другими способами выявления Helicobacter pylori, они являются прекрасным подспорьем для постановки диагноза.

В случае, если в кале обнаружен антиген хеликобактер пилори либо ДНК-фрагмент исследуемого микроорганизма, это означает, что:

• Человек инфицирован Н.руlori.
• Эрадикационная терапия недостаточно эффективна и микроб не исчез из слизистой оболочки ЖКТ.
• Прошло меньше месяца после терапии и в кале сохраняются антигены умертвлённых патогенов.

Чтобы исключить ложноположительный результат после прохождения схемы антихеликобактерной терапии (когда анализ положительный, а организм человека не содержит Н.рylori), следует не торопиться узнавать эффективность лечения, а выждать не менее одного месяца после его окончания.

Если лечение бактерии проведено успешно, спустя 1 месяц после эрадикации в кале не выявляются антигены и ДНК микроба. Результат обследования – отрицательный.

В случае выявления антигенов при первичном анализе, врач порекомендует пациенту пройти курс специальной терапии, направленной на уничтожение Н.руlori.

Результат терапии напрямую зависит от правильно составленной схемы лечения. Для определения чувствительности микроорганизмов к определенным видам антибактериальных препаратов используются специальные анализы каловых масс. Каждая методика имеет свои достоинства и недостатки. Для получения точных результатов рекомендуется провести несколько тестов.

Назначением конкретного анализа на хеликобактериоз занимается врач. Специалист учитывает индивидуальную клиническую картину состояния здоровья пациента. Сдать анализы на хеликтобактериоз можно самостоятельно, если возникают подозрения на функциональное отклонение пищеварительного тракта.

При молекулярном анализе выявляется специфическая ДНК бактерии. Код дублируется на специальном аппарате. При достижении бактерией нужного размера, ее сравнивают с этанолом. Если части ДНК совпадают с оригиналом, то результат теста положительный (хеликтобактериоз выявлен). Методика отличается высокой степенью информативности.

Особенности проведения

ПЦР — основной молекулярный способ диагностики

• Праймер. Помогает обнаружить и обозначить необходимый фрагмент.
• Полимераза. Фермент, который копирует зафиксированный участок цепочки ДНК.
• DNTP. Химические вещества, необходимые для выстраивания новой цепи.
• Образец для анализа.
• Буферный раствор. Посредством жидкости создается максимально приближенной условие для полимеразной цепной реакции.

Методом ПЦР удается накопить специфические участки ДНК в геометрической прогрессии, вследствие процедуры получается из 1-й молекулы больше 100 млн таких же. При помощи такого лабораторного способа исследования кала возможно определить присутствие Хеликобактер пилори даже в небольшом объеме. Если цепь при диагностике не образуется, значит результат теста негативный.

Преимуществом метода ПЦР является автоматизированность, при котором человек принимает минимальное участие в обследовании.

Культуральная методика

ИФА каловых масс

При диагностике таким образом определяется реакция антител к Хеликобактер пилори. Выявить Нр. удается при помощи специфической связи бактерии и антитела. При процедуре используется хромогенный субстрат, если реакция положительная, отмечается окрашенный продукт, количественное содержание которого определяют посредством споктрофотометрии. ИФА на Хеликобактер применяется чаще всего, поскольку такой метод исследования кала дает более достоверный результат и проводится быстро.

Хеликобактер пилори: анализ крови, норма

Для выявления указанной бактерии используют иммуноферментный анализ. Его суть заключается в определении концентрации антител в плазме к Хеликобактер. При попадании возбудителя во внутреннюю среду организма происходят сложные иммунные процессы, которые направлены на удаление генетически чужеродного белкового соединения, которым и является Helicobacter.

В случаях, когда инфекционный агент уже попал в организм, но иммунная система еще не успела на него отреагировать, при лабораторном исследовании можно получить ложнонегативные результаты. Также при элиминации бактерии еще некоторое время могут выявляться антитела к ней (псевдопозитивная реакция). Учитывая такую закономерность, проводят фракционное определение уровня иммуноглобулинов:

• Ig M – являются самыми большими, однако составляют только 10% от общего числа иммуноглобулинов. Эти антитела можно обнаружить раньше, чем Ig G.
• Ig A – их выявляют не только в крови, но и в соке желудка или слюне, что говорит о значительной активности патологического процесса.
• Ig G – класс иммуноглобулинов, который составляет 75% от всех типов.

Эти белковые вещества появляются через месяц после попадания инфекции в желудок. Концентрация igg прямо пропорциональна активности хеликобактерной инфекции. Кроме этого, слабоположительные результаты встречаются еще через месяц после проведения лечения и полного излечения от хеликобактериоза.

Норма анализа – это отсутствие хеликобактерной инфекции в организме. При повышении уровня всех иммуноглобулинов говорят об активном инфекционном процессе. В данном случае при оценке результатов во внимание принимают суммарные антитела.

Расшифровка

Сдать анализ кала на определение Хеликобактер пилори можно в «Инвитро», «Синево» и других лабораториях, в которых помогут правильно растолковать полученные тесты. В таблице представлены показатели, которые нужны, чтобы расшифровать полученные результаты лабораторной диагностики:

Метод	Сроки проведения	Результаты
ПЦР	5—6 часов – 2 дня	Отрицательный в случае не обнаружения ни одного генотипа микроорганизма
		Положительный с диагностированием хеликобактериоза
Бакпосев	От 7 до 10 суток	0 — бактерии Хеликобактер пилори не обнаружены
		S — чувствительность к указанному антибактериальному веществу
		R — стойкость к антибиотику
		I — умеренная чувствительность
ИФА	24 часа	Негативный, при котором присутствие бактерии не подтверждается
		Позитивный с размножением Helicobacter pylori

Итоги

• существует несколько способов определения хеликобактерии в каловых массах лабораторным методом;
• каждый вариант анализов имеет свои достоинства и недостатки;
• для получения максимально точных результатов рекомендуется сдать несколько анализов разных типов;
• каловые массы для анализа собираются с учетом ряда правил;
• за несколько дней до процедуры из рациона исключается грубая клетчатка, жареные, жирные блюда, острые специи и приправы, алкоголь и любые плоды оранжевого или красного цвета;
• емкость для кала должна быть стерильной (оптимальный вариант — аптечные тары).

Видео на тему: Чем опасна бактерия Хеликобактер Пилори?